Mutacja białka prionowego u libijskich Żydów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba czesc 4

Filtry płukano dwa razy w temperaturze pokojowej 2 x SSPE i 0,1% dodecylosiarczan sodu i przemywano dwukrotnie przy użyciu 2 x SSPE i 0,1% dodecylosiarczanu sodu przez 10 minut w temperaturze 42 ° C. Sygnał hybrydyzującej sondy wykryto na filmie rentgenowskim po jednej do dwóch godzin ekspozycji. Wyniki
Rodowe początki pacjentów
W każdym przypadku, w którym informacja o pochodzeniu przodków była dostępna, rodzina pacjenta została wyśledzona na wyspie Djerba u wybrzeży Tunezji. Dokładne historie rodzinne były czasami trudne do zdobycia; na przykład rodziny Pacjentów i 4 nie współpracowały w tym zakresie.
Kurs kliniczny
Wiek 11 pacjentów wynosił od 35 do 66 lat (średnia . SD, 53 . 11 lat). Czas trwania choroby wynosił od 3 do 10 miesięcy (średnio 5 . 2 miesiące). Pacjent z 10-miesięcznym kursem był w śpiączce i otrzymał mechaniczną wentylację przez 8 miesięcy. Wszyscy pacjenci wykazywali szybko postępującą demencję, a następnie wszyscy mieli mioklonie. Spastyczność i sztywność towarzyszyły demencji w dalszej części kursu, u niektórych pacjentów ataksja.
Wyniki Neuropathologlcal i Immunoblot
Ryc. 2. Ryc. 2. Fotomikrografia odcinka histologicznego przedniego kory mózgowej pacjenta 3, pokazująca zmianę gąbczastą (hematoksylina i eozyna, × 130). Rycina 3. Rycina 3. Immunoblot demonstrujący białko prionowe odporne na proteiny w tkance mózgowej od trzech pacjentów z mutacją Codon 200, którzy zmarli z powodu choroby Creutzfeldta-Jakoba. Tkankę (10 .g) otrzymaną przez biopsję lub autopsję zhomogenizowano w 100 .l 10 mM kwasu TRIS-chlorowodorowego (pH 8,0), 150 mM chlorku sodu, 0,5% Nonidet P-40 i 0,5% Tritonu. Po odwirowaniu przy 3000 xg przez 10 minut w temperaturze 4 ° C, podwielokrotność trawiono 10 .g proteinazy K na mlllliter przez 30 minut w 37 ° C. Niestrawione (A) i strawione (B) próbki zostały osuszone na nitrocelulozie. Blot wystawiono na działanie 3 M roztworu tiocyjanianu guanidyniowego przez 10 minut, przemyto roztworem 10 mM kwasu TRIS-chlorowodorowego (pH 8,0), 150 mM chlorku sodu i 0,05% Tween 20, inkubowano przez 30 minut w 5% niecałkowitym mleko w tym samym roztworze, a następnie wybarwione immunologicznie surowicą odpornościową .-prion-białko R073 rozcieńczoną 1: 1000. Kropki 1, 3 i 5 przedstawiają odpowiednio pacjentów 1, 2 i 3 (Tabela 1); kropki 2 i 4, próbki kontrolne ludzkiej tkanki mózgowej; kropka 6, próbka kontrolna tkanki mózgowej chomika syryjskiego; i kropka 7, próbka mózgu syryjskiego chomika z infekcją scrapie.
Badanie neuropatologiczne tkanki mózgowej od czterech pacjentów wykazało gąbczaste zwyrodnienie i glejozę, ale brak tworzenia płytek amyloidowych (ryc. 2). Immunobloty ekstraktów mózgu eksponowanych na antyserum prionowo-białkowe wykazywały proteiny prionoodporne prionu25 26 27 u wszystkich czterech badanych pacjentów; Rysunek 3 pokazuje wyniki w trzech. Wyniki te potwierdziły kliniczną diagnozę choroby Creutzfeldta-Jakoba u tych pacjentów.
Genetyka molekularna
Sekwencjonowanie amplifikowanej ramki odczytu odczytu genu prion-białko od libijskiego Żyda z Włoch (Pacjent 9) ujawniło zmianę G-to-A w pierwszej pozycji kodonu 200 w jednym allelu, co spowodowało substytucję lizyny dla glutaminianu
[hasła pokrewne: myconolak cena, myconolak, galgant cena ]