Mutacja białka prionowego u libijskich Żydów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba ad

Wyniki kliniczne i laboratoryjne u pacjentów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba * Kursy kliniczne i wyniki badań patologicznych 11 libijskich Żydów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba – 10 z Izraela i z Włoch – oraz Żyda marokańskiego z zaburzenie podsumowano w Tabeli 1. Pacjenci żyjący w Izraelu reprezentowali próbkę pacjentów obserwowaną przez 1/2 roku; pacjentów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba obserwowano kolejno od 1963 r., kiedy zidentyfikowano pierwszą. Od tego czasu zaburzenie zostało udokumentowane u ponad 160 pacjentów (Kahana E: dane niepublikowane). Historia rodzinna potwierdzonej choroby Creutzfeldta-Jakoba została wywołana u 9 z 11 pacjentów. Dokładne historie medyczne poprzedzające imigrację do Izraela lub Włoch były trudne lub niemożliwe do zdobycia. Żyd marokański (pacjent 12) nie miał rodzinnej historii tego zaburzenia. Wszyscy pacjenci spełniali ustalone kryteria dotyczące choroby Creutzfeldta-Jakoba, w tym 24 szybko postępującą demencję o znakach piramidowych, móżdżkowych lub pozapiramidowych; mioklonus; okresowe kompleksy od do 2 cykli na sekundę w badaniu elektroencefalograficznym; i czas trwania choroby krótszy niż 12 miesięcy. Skomputeryzowana tomografia osiowa i rezonans magnetyczny mózgu oraz analiza płynu mózgowo-rdzeniowego dały prawidłowe wyniki u wszystkich pacjentów. U 4 pacjentów wykonano badanie neuropatologiczne za pomocą mikroskopu świetlnego tkanki mózgowej uzyskanej podczas biopsji lub autopsji. Immunoblotting tkanki przeprowadzono przed trawieniem i po trawieniu proteinazą K zgodnie z wcześniej opisaną metodą.25 Nieprawidłowe formy białka prionowego charakterystycznie są oporne na trawienie proteinazą K, podczas gdy normalne białko prionu jest łatwo hydrolizowane przez enzym.
Sterownica
37 niespokrewnionych libijskich Żydów wybranych do próby kontrolnej spełniało następujące kryteria: nie mieli oni żadnych osobistych lub rodzinnych wywiadów dotyczących choroby neurologicznej i byli starsi od najstarszego libijskiego Żyda z potwierdzoną chorobą Creutzfeldta-Jakoba – tj. Mającą ponad 66 lat.
Badania genetyczne
Ekstrakcja DNA i amplifikacja ramki Prion-Protein OpenReading
Osad leukocytów otrzymano przez odwirowanie 10 ml pełnej krwi antykoagulowanej za pomocą EDTA lub cytrynianu, do którego dodano 40 ml 0,144 M chlorku amonu i 0,5 ml 0,1 M wodorowęglanu amonu w celu zlizowania erytrocytów.
DNA otrzymano przez lizę peletki leukocytów za pomocą 9,4 ml roztworu zawierającego 150 mM chlorek sodu, 50 mM TRIS kwas solny (pH 7,5) i mM EDTA, 0,1 ml proteinazy K (10 mg na mililitr), i 0,5 ml dodecylosiarczanu sodu (10% wag./obj.). Mieszaninę wytrząsano delikatnie ręcznie lub mechanicznie przez 30 minut w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano przez 30 minut w 55 ° C. Fazę wodną wyekstrahowano fenolochloroformem i ostrożnie usunięto, aby interfaza nie została zakłócona. DNA wytrącono z fazy wodnej za pomocą ml octanu sodu (2 M) i 20 ml etanolu w temperaturze pokojowej i nawijano sterylną pipetą. Po spłukaniu w 5 do 10 ml 70% etanolu, DNA rozpuszczono przez inkubację przez kilka godzin w 55 ° C w 0,5 do ml 10 mM TRIS (pH 7,5) z mM EDTA.
Rysunek 1
[przypisy: procto hemolan control, chirurgia stomatologiczna warszawa, doreta cena ]